Diddymu polypeptidau
Mae gan bob asid amino briodweddau cemegol cynhenid ac mae hydoddedd peptid yn dibynnu ar ei ddilyniant a'i addasiadau. Rydym yn argymell cymryd ychydig bach o'r peptid ar gyfer profi hydoddedd cyn hydoddi'r holl peptidau.
Mae hydoddi peptidau yn gam pwysig iawn. Gall hydoddi amhriodol arwain at golli peptid neu fethiant arbrofol. Mae hydoddedd peptidau yn bennaf yn dibynnu ar ddilyniant y peptid, felly rhowch sylw wrth ddylunio'r peptid. Argymhellir y dylai'r dilyniant peptid gynnwys 20% o weddillion wedi'u cyhuddo i gynyddu ei hydoddedd.
Cyn ei ddefnyddio, gall cwsmeriaid ddilyn y tair egwyddor sylfaenol ganlynol i ddewis toddydd addas i doddi'r peptid.
Yn gyntaf, rhaid i'r toddydd a ddewiswyd allu diddymu'r peptid yn llawn; Yn ail, rhaid i'r toddydd a ddewisir fod yn gydnaws â'r amodau arbrofol; Yn olaf, rhaid i'r toddydd a ddewiswyd beidio ag adweithio â'r peptid na'i ddiraddio.
Cyn belled â bod swm y peptid yn caniatáu, gallwch chi doddi cyfran fach o'r peptid yn gyntaf ac yna diddymu'r sampl gyfan. Os oes angen i chi adennill y peptid o doddydd, gallwch ddewis toddydd cychwynnol sy'n ei gwneud hi'n hawdd ei dynnu ar ôl lyophilization.
Gall yr awgrymiadau canlynol eich helpu i doddi peptidau:
Yn gyffredinol, mae peptidau â llai na 5 asid amino yn hydawdd mewn hydoddiannau dyfrllyd, ac yn gryf asidau amino hydroffobig (W, I, L, F, M, V, Y) ac eithrio.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25% Asidau amino gwefredig (E, D, K, R, H) o peptidau hydroffilig ac yn cynnwys<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% Gall asidau amino gwefredig hefyd fod yn anhydawdd neu'n rhannol hydawdd mewn dŵr. Mae'n well toddi'r peptid yn gyntaf mewn lleiafswm o doddydd organig cryf fel DMF, ACN, alcohol Isopropyl, ethanol, asid asetig, 4-8 M GdnHCl, wrea, neu DMSO (ddim mewn dilyniant C, W, M), a thoddyddion organig tebyg eraill. Mae'n well ychwanegu'r toddydd organig sy'n hydoddi'r peptid yn araf i'r hydoddiant dyfrllyd fesul gollwng. Os daw'r hydoddiant yn gymylog, efallai ei fod wedi cyrraedd y terfyn hydoddedd ac nad oes unrhyw ddefnydd wrth barhau i'w hydoddi. Dylid nodi y dylai'r toddydd a ddewiswyd i ddechrau fod yn gydnaws â'r system arbrofol.
Hydrophobic amino acid content >75% Yn gyffredinol, mae peptidau hydroffobig cryf hefyd yn anhydawdd mewn hydoddiannau dyfrllyd. Dylid trin peptidau o'r fath yn gyntaf hefyd â thoddyddion organig cryf (ee TFA, asid fformig) hydoddi a gallant hefyd waddodi os cânt eu hychwanegu at hydoddiant dyfrllyd. Efallai y bydd angen crynodiadau uchel o doddyddion organig ar yr hydoddiant peptid terfynol i'w ddadnatureiddio, ac yn gyffredinol ni ddefnyddir toddyddion organig ar gyfer astudiaethau swyddogaeth fiolegol mewn celloedd byw.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Mae dilyniannau polypeptide yn tueddu i ffurfio rhwydweithiau bond hydrogen rhyngfoleciwlaidd segur ac yn ffurfio geliau'n hawdd mewn hydoddiannau dyfrllyd crynodedig. Gellir hydoddi peptidau o'r fath fel y disgrifir yng ngham 3. Er mwyn lleihau problemau posibl yn ystod diddymu, argymhellir bod cwsmeriaid yn talu mwy o sylw i'r dyluniad a'r dilyniant i wella hydoddedd y peptid.